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Q1：PacBio平台的测序原理？ 

A1：PacBio是基于单分子实时测序Single-Molecule,Real-Time(SMRT)技术：建好的文库 放在SMRTCell上进行测序，SMRTcell中有15万个Zero-ModeWaveguides(ZMWs)孔，每个孔下面固定DNA合成酶，当待测DNA分子下降到孔中时会与DNA合成酶结合，同时在该酶的催化下，进行了DNA链的合成。由于使用了带有荧光标记的dNTP，在合成时荧光基团会发出亮光，通过检测荧光来读取碱基。 

Q2：PacBio全长转录组测序的优势？ 

A2：相比于Hiseq平台的转录组，PacBio转录组不需要组装就可以得到全长转录本 的信息，可分析得到更多真实存在的转录本，准确性更高。 

Q3：PacBio转录组为什么要建3或4个文库？ 

A3：假如构建1个文库，片段范围是1-10K，得到的测序数据中大部分是小片段序列，大片段序列所占的比例会非常少，数据量也就很少，因为小片段更利于掉入ZMW小孔中。构建多个不同片段范围的文库，可以解决该问题。 

Q4：PacBio转录组每个cell能产生多少数据量？ 

A4：大概1Gb。