威九国际

Q1：应如何选择使用iTRAQ定量或Label-free定量？

A1：若同组比较的样本数≤8，建议选择iTRAQ标记技术；若同组比较的样本数＞8，建议选择Label-free；若希望蛋白鉴定数越多越好，少量样品也可使用Label-free。

Q2：样品重复、技术重复和上机重复有什么区别？

A2：样品重复也可称生物重复。生物重复是指样品来自同一处理组的不同样品，是整个实验的完全重复，如平行培养的细胞或细胞株。技术重复是指对同一生物样品进行重复实验，可降低实验中的测量误差或背景噪音。上机重复是指是指同一样品进行重复上机检测。

Q3：有些差异表达基因没有对应的差异蛋白是什么原因？

A3：从生物学角度看，由于miRNA调控、蛋白降解、蛋白分泌、转录和翻译效率不一致等原因，导致蛋白水平和转录水平未必呈现一样的趋势，这是正常现象。如果这些差异基因恰恰是老师感兴趣的，威九国际建议针对这些目标蛋白用MRM方法做一下“目标蛋白分析”，如果老师已有相关的研究基础，也可以用抗体的方法验证。因为当威九国际的研究视角落到一定范围内的时候，高通量的结果也需要进一步的仔细验证。

Q4：不同老师的样本做iTRAQ定量可否同一组上机？

A4：不能。因为即使是同一个物种的样品，经过不同实验室处理后，里面蛋白含量和数目会有较大差别，混在一起后会影响两组不同来源的样品的蛋白鉴定数目。而对于来自不同物种的样品，信息分析的数据库选择会不同，无法进行比较。

Q5：Label-free定量有哪些技术特点？

A5：Label-free定量对液相色谱串联质谱的稳定性和重复性要求较高；无需昂贵的同位素标签作内部标准，实验耗费低；对样本的操作也最少，从而使其最接近原始状态，并且不受样品条件的限制，克服了标记定量技术在对多个样本进行定量方面的缺陷。