转录组是指某个物种或者特定细胞在某一生理条件下产生的所有转录本的集合,主要包括mRNA和ncRNA,目前转录组测序主要指mRNA测序。转录组测序能够从整体水平研究转录本的功能及基因结构,既可发现新的转录本,研究可变剪接方式,又可得到基因的差异表达信息,进一步研究基因的生物学功能。转录组测序已广泛应用于基础研究、临床诊断和药物研发等领域。
无参转录组是指没有参考基因组、或没有参考基因序列的物种进行转录组测序及分析,可以组装得到该物种的转录组序列,丰富转录本数据库信息,通过基因差异表达可以得到生物学功能相关的基因等。

图1 无参转录组分析流程图

图1 SSR长度分布图 图2 DEG的MA-plot分布图

图3 DEG的Volcano-plot分布图 图4 转录因子家族分类
图5 差异基因GO功能富集结果
经典案例
红花转录组De novo研究发现与油质蛋白和黄酮合成相关的基因 PLoS ONE. 2012.
De Novo Transcriptome of Safflower and the Identification of Putative Genes for Oleosin and the Biosynthesis of Flavonoids. PLoS ONE, 2012, 7(2): e30987. doi:10.1371/journal.pone.0030987.
本文选用红花种子、叶、花瓣3个组织样品,提取Total RNA后进行转录组测序,对序列进行组装,基因差异表达分析以及GO、Pathway分析。组装得到了153,769个基因,其中8个基因与油质蛋白合成相关,23个基因与黄酮类化合物合成相关。
图1 GO分析结果
图2 黄酮素生物合成相关的Pathway分析
推荐文献
[1] De novo assembly and characterization of the transcriptome of the parasitic weed Cuscuta pentagona identifies genes associated with plant parasitism. Plant Physiology Preview. 2014, DOI:10.1104/pp.113.234864.
[2] Development of an expressed gene catalogue and molecular markers from the de novo assembly of short sequence reads of the lentil ( Lens culinaris Medik.) transcriptome. Plant Biotechnology Journal. 2012, doi: 10.1111/pbi.12082.
[3] De Novo Analysis of Transcriptome Dynamics in the Migratory Locust during the Development of Phase Traits. PLoS One. 2010, doi: 10.1371/journal.pone.0015633.
测序策略
产品类型 | 建库类型 | 测序策略 | 建议数据量(Clean data) | 周期 |
无参真核转录组 | 常规转录组文库 | Illumina HiSeq,PE100或PE150 | 6G以上 | 40工作日 |
无参原核转录组 | 常规转录组文库 | Illumina HiSeq,PE100或PE150 | 1 Gb | 40工作日 |
送样建议
样品类型 | 总量 | 浓度 | 其他要求 |
动植物、昆虫 TotalRNA | 200ng | 20ng/μL | RIN>6.0,28S/18S≥1.0(昆虫无RIN和28S/18S的要求)
图谱基线无上抬,5S 峰正常。 |
真菌 Total RNA | 0.5μg | 40ng/μL | RIN>6.0,28S/18S≥1.0,图谱基线无上抬,5S 峰正常。 |
ds cDNA | 0.5μg | 15ng/μL | 片段主要分布在 1 K 以上 |
原核Total RNA | 0.5μg | 40ng/μL | RIN>6.0,23S/16S≥1.0,图谱基线无上抬,5S 峰正常。 |
未打断的、oligo(dT)纯化的mRNA,
去rRNA 的RNA | 30ng | 6ng/μL | rRNA<10%,片段主要分布在 1 K 以上 |
新鲜动物组织干重 | 30mg | / | / |
新鲜植物组织干重 | 50mg | / | / |
新鲜培养细胞数/菌体 | 2×105个 | / | / |
全血 | 0.3mL | / | / |
FFPE样本 | 100mm2,10μm厚的切片2片以上 | / | / |
FAQ
转录组测序常见问题