ChIP-Seq
染色质免疫共沉淀(ChromatinImmunopreciption,ChIP)是研究蛋白质-DNA相互作用的经典实验方法,ChIP与高通量测序的结合(ChIP-Seq)可以在全基因组范围内对蛋白质结合位点进行高效而准确地筛选与鉴定,广泛应用于组蛋白修饰、转录因子调控等相关领域的研究。
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染色质免疫共沉淀(ChromatinImmunopreciption,ChIP)是研究蛋白质-DNA相互作用的经典实验方法,ChIP与高通量测序的结合(ChIP-Seq)可以在全基因组范围内对蛋白质结合位点进行高效而准确地筛选与鉴定,广泛应用于组蛋白修饰、转录因子调控等相关领域的研究。
图1 Wnt signaling Pathway
经典案例
ChIP-seq研究增强子图谱助力髓母细胞瘤分型 Nature. 2016.
Active medulloblastoma enhancers reveal subgroup-specific cellular origins. Nature. 2016, doi: 10.1038/nature16546.
本文研究了不同亚型髓母细胞瘤相关基因增强子表观调控功能,作者取了四种亚型的髓母细胞瘤样本,提取总DNA,以BRD4、H3K27ac、H3K27me3、LMX1A、HLX、LHX2和H3K4me1等蛋白为靶标进行ChIP富集及测序,并进行增强子图谱、转录组、增强子靶基因预测、靶基因功能等分析。共鉴定到20406 个差异活性增强子,并得到H3K27ac增强子的靶基因,增强子可通过cis作用调控转录因子和染色质形成调控复合物,同时能传递信号给RNA聚合酶,从而调控靶基因的表达。
图1 不同亚型髓母细胞瘤差异活性增强子数目及聚类图
图2 不同亚型髓母细胞瘤H3K27ac增强子在不同染色体位置的信号图
推荐文献
[1] Mapping of long-range chromatin interactions by proximity ligation-assisted ChIP-seq. Cell Res. 2016, doi: 10.1038 /cr.2016.137.
[2] ChIP-Seq Analysis of the σE Regulon of Salmonella enterica Serovar Typhimurium Reveals New Genes Implicated in Heat Shock and Oxidative Stress Response. PLoS One. 2015, doi: 10.1371/journal.pone.0138466.
[3] Identification of transcription factor binding sites from ChIP-seq data at high resolution. Bioinformatics. 2013, doi: 10.1093/bioinformatics/btt470.
测序策略
产品类型 | 建库类型 | 测序策略 | 建议数据量(Clean data) | 周期 |
ChIP-Seq文库 | Illumina HiSeq,SE50或PE100或PE150 | 20M reads |
送样建议
样品类型 | 总量 | 浓度 | 其他要求 |
ChIP-ed DNA | 10ng | 50ng/μL | 主峰在100bp-500bp之间 |
人、小鼠肝脑组织 | 1g | / | / |
新鲜培养细胞数 | 5×107个 | / | / |
FAQ
ChIP-Seq常见问题
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